单增李斯特氏菌及其检测方法

一、单增李斯特氏菌
! n( s7 R' m+ m    单增李斯特氏菌，学名Listeria monocytogenes，一种革兰氏阳性菌，是李斯特菌属。李斯特菌属(Listeria)共分为2个群， 7个种：第一群包括单核细胞增生性李斯特菌(L monocytogenes，LM)(亦称产单核细胞李斯特菌)、伊氏李斯特菌(L ivanovii)(亦称绵羊李斯特菌)、英诺克李斯特菌(L innocua)(亦称无害李斯特菌)、韦氏李斯特菌(L welshimei)、塞氏李斯特菌(L seeligeri)，第二群包括格氏李斯特菌(L grayi)和莫氏李斯特菌(L mulTayi)。其中，单增李斯特菌是唯一能引起疾病的人畜共患病的病原菌。它能引起人、畜的李氏特菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。
9 I3 }6 H# F$ t6 c二、单增李斯特氏菌检测方法
       1.细菌培养法
    该菌营养要求不高，兼性厌氧，最适在含有CO2的微需氧环境中生长，生长温度范围-1.5℃-45℃，最适温度为30℃-37℃，能在普通冰箱冷藏室生长，是一种典型的耐冷性细菌，同时还具有耐盐性。LM在普通琼脂平板上呈细小直径约0.2-0.4μm、半透明露水样菌落。在血琼脂平板上有β溶血环。在显色培养基上呈蓝绿色。
食品中李斯特氏菌的传统检验方法是进行前增菌或选择性增菌，以分离培养得到的可疑菌落做生化反应实验、溶血实验、协同溶血实验（CAM P）等免疫学检测，被确定为李斯特氏菌后进一步进行血清分型［１］ 。该方法中增菌和选择性增菌是不可缺少的步骤。增菌的方法主要包括：冷增菌法和常温培养方法。冷增菌法是在4℃ 培养30 d ，有时甚至长达一年。常温增菌需培养24 h 至7 d 。故传统检测方法需要7-11 d 才能分离鉴定出李斯特氏菌，故传统方法检测周期较长。
1 |2 N7 _6 y8 [     2.血清凝集法
# f5 Q0 ?) v5 t: o! L6 E    根据菌体抗原和鞭毛抗原，LM分为16个血清型：1／2a、1／2b、1／2c、3a、3b、3c、4a、4ab、4b、4c、4d、4e、5、6a、6b、7。抗原结构与毒力无关，对人致病的主要为血清型1／2a、1／2b、4b，占全球本病病例约90％。
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      3.分子生物学检测方法
! }9 @! a4 {: M4 A' N    随着核酸探针杂交技术的应用，使对单核细胞增生性李斯特氏菌的检测进入了分子水平。
) t8 \% C/ q: t0 g4 f    3 .1 　探针检测技术
/ H7 o! c2 {6 ^2 w这一技术是最早应用于李斯特氏菌检测的分子生物学技术。早在１９８８ 年，Atin 等［１１］就克隆出李斯特氏菌β 溶血素基因的一个５００ bp DNA 片断并测序，以此序列合成４ 种寡核苷酸探针，以３２P 标记该探针，经斑点杂交实验证实，该探针只与李斯特氏菌反应，与其他种的李斯特氏菌和属外的细菌均呈阴性，表现出很好的特异性。但探针杂交无法分辨死菌和活菌，尽管通过增菌可使死菌比例减少，相对地减少假阳性，但并不能完全杜绝假阳性结果。随着探针技术的逐渐成熟，人们开始关注将多个DNA 特异性探针固定到芯片上，制成基因芯片。基因芯片的特点是可同时检测多种菌，可以减少实验次数，并且检测所需的引物较少［１２］ 。
4 @/ n: ?4 }5 S4 m9 S. q   3.2 聚合酶链式反应（poly merase chain reaction ，PCR）检测技术
PCR 的发展已经相当成熟，广泛应用于李斯特氏菌的检测。PCR 扩增特异性引物一种是依据李斯特氏菌的特异毒力基因序列而设计，一种是依据李斯特氏菌基因组中特异序列而设计。常用的靶序列为hly A 、iap 、inl 、Dth-１８ 等毒力基因。利用PCR 方法来检测李斯特氏菌的优点是方法的特异性好，不足之处是灵敏度较低；将样品培养物经化学抽提后再进行扩增，提高了样品的检出率［１３］ ；并且可以检测到传统增菌方法不能检出的“活的非可培养”的李斯特氏菌。PCR 技术还可对李斯特氏菌进行定量检测。例如Nogva 等［１４］运用５′-核酸酶PCR 对单增李斯特氏菌定量；Choia 等［１５］运用cPCR 对李斯特氏菌进行定量；Long 等［１６］ 以hly 为靶基因，采用PCRELISA联合检测技术。
参考资料：
. i. j7 @: i6 X1 p8 h" l单增李斯特菌检测方法研究进展 《中国实验诊断学》 2010年11期
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