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[经验] PCR 实验室是否产生假性结果,基本出发点在于“压差控制”

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SICOLAB 发表于 2020-4-29 15:20:52 | 显示全部楼层 |阅读模式

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PCR实验室设计、装修、建设SICOLAB! m$ X4 V8 l, G8 i  Z
PCR 实验室是否产生假性结果,基本出发点在于“压差控制”,为什么这么说,SICOLAB现简述一下我们的想法观点,欢迎共同交流讨论!; e. E  k% C1 m7 ^  H
众所周知,PCR 实验室的各个实验区域之间应形成单向工艺流、物 流、人流与气流,实现单向流程的屏障保护。通过严格的单向流线,避免实验之间的相互干扰和交叉污染,防止核酸气溶胶对实验过程造成污染,产生假性结果。
! c0 P/ g/ ?% n+ J  K* G$ B一、基本了解/ U) M/ X/ G# k0 _1 r
1、四个过程
5 D+ D7 M* N% Q4 W% |1 ~(在这里面的医学检验、病理、分子生物等专业的人都基本了解,SICOALB就不多重复了,简单说一下)PCR 实验室又叫基因扩增实验室,是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称,用于放大特定的 DNA 片 段,可看作生物体外的特殊 DNA 复制。完成一组 PCR 实验,通常需经过试剂准备、样品制备、核酸扩增和产物分析 4 个过程。
) q  N1 h) s  S4 X4 l, N; }2、单一流向
9 @/ v/ W2 l- O8 G3 m! x) Q为避免交叉污染,进入各个区域的工作流程须严格遵循单一方向进行,按照清洁-半污染-污染的顺序排列,各区内的试剂和耗材不能再进入任何“上游”区域。也就是(试剂准备区-样品制备区-核酸扩增区-产物分析区)。# i: N: Z  U- Y. _( l
其中,试剂准备区、样品制备区为扩增前区,核酸扩增区、产物分析区为扩增后区。扩增前区与扩增后区应严格分开,必须使用不同的房间,两区之间设置一定的隔离。如使用全自动分析仪,核酸扩增区、产物分析区可合并为扩增产物分析区。$ N1 ?; \+ b+ C6 k0 s1 n. z' R! ~
三、PCR实验室的布局形式& x) S  Q! E' y# {/ m
一是分散形式,二是组合形式。
3 Q/ v7 }+ A/ u7 G, D1、分散形式是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较远,分散布置。对于这种布置方式的 PCR 实验室,由于各个实验之间不易相互干扰,因此无特殊要求。
6 n" ^- h: k# l: s/ D2、组合形式是指完成 PCR 4 个实验过程的实验用房彼此相邻、集中布置,形成一块完整、独立的实验区域。由于各个实验用房集中布置,容易造成相互干扰,因此,对总体布局以及屏障系统具有严格的要求。
" h" ~; x" ^' }. C& a6 S+ f* V+ I6 U四、PCR实验室的压差控制是避免污染核心
" t; g( d4 X% z0 [7 G# i2 b: R1、压差的控制主要分为两种:一是不带缓冲间,二是带缓冲间。- T* @* n' R/ x8 L: u
不带缓冲间:由于场地限制及投资限制,一些新建 PCR 实验室仅由专用走廊与 4 个实验区组成,每个实验区无专用的缓冲间。4 个实验区共用 1 个专用走廊,工作流线由左向右。
  i; p: V! A. b0 l2 G/ V实验时,人流与物流分离,工作人员通过专用走廊进出各实验区,试剂和样品通过带联锁装置的传递窗进行传递,保证试剂和样品在传递过程中不受污染。
- W* ?1 m3 I* i3 R, N# ^ 图片2.png
8 N9 J7 J# H- |+ _; O# z带缓冲间:在场地和投资均允许的情况下,PCR 实验室较为理想的布置方式,是每个实验区均带一个专门的缓冲间。带缓冲间的PCR实验室又可分为四个区皆带缓冲间,也可分为只有一个“产物分析区”不带缓冲间的。$ ]' Y/ n& w1 ?+ l
图片3.png ! q" n% W. k1 |4 n% `9 P
图片4.png
& o1 `/ I3 l' I5 e  t3、常见PCR实验室压差设计0 E9 `5 @2 S3 c. H+ c
        PCR 实验室的各个实验区域之间应形成单向流程的屏障保护,环境压力从试剂准备区到产物分析区,逐渐递减。
' f. k# |0 M) J/ H' Y7 A/ L5 g- [1)试剂准备区是工艺流线的开始,设计为正压或常压,避免外界环境的污染。
) I) u0 G9 a, O& [9 m* c' I2)样品制备区一般为常压或负压,大多数情况下设计成二级生物安全实验室,避免实验产物溢出,污染外界环境。
7 `% h  G) F  z8 Y( c2)核酸扩增区为负压,避免实验产物溢出,污染外界环境。
, s( S* f  Z% F9 j3)产物分析区是最主要的扩增产物污染来源,通常压力设计为最低,避免实验产物溢出,污染外界环境。
) @; f' y. w8 X- ~4)以上为SICOLAB整理,实验室整体设计建设工程、生物样本建设工程、GMP环境建设工程、环保工程。
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