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[经验] PCR 实验室是否产生假性结果,基本出发点在于“压差控制”

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SICOLAB 发表于 2020-4-29 15:20:52 | 显示全部楼层 |阅读模式

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PCR实验室设计、装修、建设SICOLAB3 J" `6 J  v. }. ~8 H  Y0 ~# p: j# ?
PCR 实验室是否产生假性结果,基本出发点在于“压差控制”,为什么这么说,SICOLAB现简述一下我们的想法观点,欢迎共同交流讨论!
& \' J/ [% A5 U3 N众所周知,PCR 实验室的各个实验区域之间应形成单向工艺流、物 流、人流与气流,实现单向流程的屏障保护。通过严格的单向流线,避免实验之间的相互干扰和交叉污染,防止核酸气溶胶对实验过程造成污染,产生假性结果。
/ u# x7 s7 }5 T# s* P9 m一、基本了解
0 H6 X" J# T7 @! b# @" k* Z+ h! ?1 n1、四个过程
2 a& a  I' E  D7 p3 S: q8 Z* d(在这里面的医学检验、病理、分子生物等专业的人都基本了解,SICOALB就不多重复了,简单说一下)PCR 实验室又叫基因扩增实验室,是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称,用于放大特定的 DNA 片 段,可看作生物体外的特殊 DNA 复制。完成一组 PCR 实验,通常需经过试剂准备、样品制备、核酸扩增和产物分析 4 个过程。
8 y  c7 X" r- w( W& f/ O' E; H2、单一流向( e# @9 X0 P2 V
为避免交叉污染,进入各个区域的工作流程须严格遵循单一方向进行,按照清洁-半污染-污染的顺序排列,各区内的试剂和耗材不能再进入任何“上游”区域。也就是(试剂准备区-样品制备区-核酸扩增区-产物分析区)。
- }4 p% \  B  W% u, N其中,试剂准备区、样品制备区为扩增前区,核酸扩增区、产物分析区为扩增后区。扩增前区与扩增后区应严格分开,必须使用不同的房间,两区之间设置一定的隔离。如使用全自动分析仪,核酸扩增区、产物分析区可合并为扩增产物分析区。
* B0 g  a) u9 Z" D1 H) _三、PCR实验室的布局形式
; G8 p& K) t- R  x8 @一是分散形式,二是组合形式。
* ?( v0 t+ L% U+ w1、分散形式是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较远,分散布置。对于这种布置方式的 PCR 实验室,由于各个实验之间不易相互干扰,因此无特殊要求。
: j+ @( `: U: K- x2、组合形式是指完成 PCR 4 个实验过程的实验用房彼此相邻、集中布置,形成一块完整、独立的实验区域。由于各个实验用房集中布置,容易造成相互干扰,因此,对总体布局以及屏障系统具有严格的要求。" z6 H, m3 m1 X1 g5 t# x
四、PCR实验室的压差控制是避免污染核心
& H) v7 m( u, b# K$ Y: p/ a1、压差的控制主要分为两种:一是不带缓冲间,二是带缓冲间。
; p% ?. K3 \$ a! z5 O' ^" g6 w不带缓冲间:由于场地限制及投资限制,一些新建 PCR 实验室仅由专用走廊与 4 个实验区组成,每个实验区无专用的缓冲间。4 个实验区共用 1 个专用走廊,工作流线由左向右。1 N8 N8 H; r$ q; Y0 l; K( D
实验时,人流与物流分离,工作人员通过专用走廊进出各实验区,试剂和样品通过带联锁装置的传递窗进行传递,保证试剂和样品在传递过程中不受污染。
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; v+ x# O" u# n% ]带缓冲间:在场地和投资均允许的情况下,PCR 实验室较为理想的布置方式,是每个实验区均带一个专门的缓冲间。带缓冲间的PCR实验室又可分为四个区皆带缓冲间,也可分为只有一个“产物分析区”不带缓冲间的。0 O6 f) b8 J$ a. f* ?
图片3.png ' ~$ M; F8 h. r# w1 H: S3 b
图片4.png 3 `5 q4 D" ~" @/ P  _8 n2 S
3、常见PCR实验室压差设计
8 p9 d( n" @8 H5 d        PCR 实验室的各个实验区域之间应形成单向流程的屏障保护,环境压力从试剂准备区到产物分析区,逐渐递减。 5 P7 t$ a2 J' o7 Q) ?
1)试剂准备区是工艺流线的开始,设计为正压或常压,避免外界环境的污染。
; A3 X; e& C( T8 e, b) t2)样品制备区一般为常压或负压,大多数情况下设计成二级生物安全实验室,避免实验产物溢出,污染外界环境。 / }: K1 E, m: C( a" ?! @# W
2)核酸扩增区为负压,避免实验产物溢出,污染外界环境。
9 p. ~  [. o+ l  k" Y$ A( u) S, R3)产物分析区是最主要的扩增产物污染来源,通常压力设计为最低,避免实验产物溢出,污染外界环境。" A" K. @+ g# g% H- L1 [' m. s
4)以上为SICOLAB整理,实验室整体设计建设工程、生物样本建设工程、GMP环境建设工程、环保工程。
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